Giải có sự tham dự của 10 đội bóng, trong đó có 1 đội xuống hạng từ Giải Hạng Nhì 2019 là Bến Tre do rút lui, 5 đội bóng mới bao gồm: Thái Nguyên, Luxury Hạ Long, Đào Hà Vĩnh Phúc, Tuấn Tú Phú Thọ, Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh, Trẻ Viettel và 4 đội hạng Ba Quốc gia 2018 là PVF, Đồng Nai, Bắc Ninh, Phù Đổng Hà Nội.

Các đội bóng được chia làm hai bảng theo khu vực địa lý và đăng ký sân thi đấu của các đội, cụ thể như sau:

• Bảng A: Thái Nguyên, Bắc Ninh, Đào Hà Vĩnh Phúc, Luxury Hạ Long, Tuấn Tú Phú Thọ, PVF, Trẻ Viettel.
• Bảng B: Bến Tre, Đồng Nai, Phù Đổng Hà Nội (sau đổi thành Hà Nội Sun FC), Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh.

Ngày 31/10/2019, theo thông báo trên web chính thức của VFF, Liên đoàn Bóng đá Việt Nam đã nhận được công văn xin không tiếp tục tham dự giải của đội bóng đá Bắc Ninh. Căn cứ đề nghị của đội bóng, Liên đoàn Bóng đá Việt Nam chấp thuận cho đội bóng đá Bắc Ninh không tham dự giải.[3]